偶联抗体荧光素有哪些？如何标记你知道么？

作者：杨超月

流式细胞术--偶联抗体荧光素有哪些？如何标记你知道么？

2021-01-26 12:00 来源:生物医学科研实验

原标题：流式细胞术--偶联抗体荧光素有哪些？如何标记你知道么？

荧光信号是流式细胞仪接收处理的重要信号，应用荧光技术使流式细胞术发生了 质的飞跃，使流式细胞术发展成为广泛应用于基础生物医学研究和临床诊断的技术。

流式细胞仪接收到的荧光信号来源于结合在样品细胞上的荧光素，荧光素偶联抗体或者荧光染料与细胞结合后就会使细胞带有相应的荧光素，该荧光素被相应激光激发后产生特定波长的荧光，分析该 荧光信号的强弱就可以间接反映样品细胞的某些特征。

荧光素

荧光素（fluorochrome）多是一些 化学试剂，有天然的、半天然的，也有人工合成的；还有些是蛋白质。荧光素在未被激发时外层电子处于基态，当被特定波长的激光激发后，外层电子接收到足够的能量就会跃迁到激发态，处于激发态的荧光素外层电子不稳定，会自发 从激发态回到基态，同时释放出特定波长的荧光。这就是荧光素产生荧光的原理。

不同的荧光素有其特定的激发光和发射光，所以，流式分析时可以同时标记发射不同波长荧光的荧光素。这些荧光素被激发后发射的荧光被不同的荧光通道接收，它们之间的 信号采集和分析不会相互干扰，从而使多荧光通道分析成为可能。

流式细胞术发展到现在，已经有很多种荧光素被用于流式分析。

一般荧光素

应用于流式细胞术的常用荧光素总结于下表中。

CFSE全称为羟基荧光素乙醋酸盐瑰珀酰亚胺脂；

注：该表不包括Alexa Fluor系列和QD系列荧光素。

FITC是流式细胞术最常用的荧光素，该荧光素较为稳定，与FITC偶联的流式抗体种类也最多。FITC由最常见的 488nm激光器激发，其发射的荧光信号被 第一荧光通道（FL1）接收。流式细胞术单色分析时常用FITC偶联的抗体。 PE荧光素使用也较为广泛，也是由 488nm激光器激发，发射的荧光信号 通常被荧光通道FL2接收，其荧光信号较强，适 用于弱表达的抗原分子的分析。流式细胞术双色分析时通常采用FITC和PE荧光素。

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单激光器的流式细胞仪一般配备488nm激光器，可以 同时进行3色分析，即有3个荧光通道，FL1接收FITC的荧光信号，FL2接收PE的荧光信号，FL3可以接收 Percp或者PE-Cy5的荧光信号。因为Percp和PE-Cy5的荧光信号是被同一个荧光通道接收的，所以在流式分析时，不能同时使用这两种荧光素偶联的抗体。

APC也是较为常用的荧光素，其荧光信号也很强，同样 适用于弱表达的抗原分子的分析，但是它 不能由488nm激光器激发，而只能 由635nm红激光器激发，所以488nm单激光器的流式细胞仪无法分析APC的荧光信号。如果流式细胞仪同时配备有635nm红激光器，就可以使用APC荧光素。如 BD公司的LSRⅡ分析型流式细胞仪，可以同时进行4色分析，FL4接收的就是APC的光信号。

PE-Txred、PE-Cy7和APC-Cy7荧光素不常使用，一般只能在有更多荧光通道的流式细胞仪如9通道或者12通道的流式细胞仪上使用。

CFSE和PKHI26荧光素不与抗体偶联，而是单独使用，CFSE能够 与细胞膜上和细胞内的蛋白质非特异性结合，PKH26能够 嵌入细胞膜的双分子层中，用于细胞示踪和检测细胞增殖等。

（E）CFP、（E）GFP和（E）YFP为指示蛋白，其中 （E）GFP最为常用，常将其整合于基因组中，用于非特异性指示该转基因小鼠的所有细胞或者特异性指示某种细胞；（E）CFP和（B）YFP是一对理想的能够实现荧光共振能量转移的荧光素， 可以用于检测蛋白质与蛋白质的直接结合。

Hoechst3312可标记活细胞，多用于分选侧群干细胞。

PI荧光素用于 检测细胞的DNA含量，可用于细胞周期检测，此外PI也可用于区分活细胞和死细胞。

7-AAD用于标记死细胞，在需要明确区分活细胞和死细胞时使用。