关于考马斯亮蓝测定蛋白质
第一，考马斯亮蓝的配制。
1.称取考马氏亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）50mg，
2. 加95%乙醇25ml溶解，
3. 加85%磷酸50ml，
4. H2O定容到500ml，
5. 过滤去除少量未溶解物。
6. 4℃保存备用。
实验室没有95%乙醇，我偷懒，直接加的无水乙醇，然后加磷酸，搅了好长时间，都溶不了， 未溶物根本不是“一点”的问题。
然后又用纯酒精重新配置了一遍，结果还是不溶。
后来没有过滤，直接用酒精容得这个考马斯亮蓝液测的，吸光值太大，蛋白浓度在0.25mg/L时，习惯值已经接近1了。浓度再高，做标曲的点就开始趋于平缓，吸光值跟浓度不成线性关系。
我有几个问题：
1.这里的乙醇是不是用来溶解考马斯亮蓝的？必须用95%的？
2.磷酸有什么用处？
3.如何让考马斯亮蓝溶解？
4.考马斯亮蓝法有能不能测溶液中所有可溶性蛋白？氨基酸能测吗？
刚开始做实验，希望虫哥虫姐们帮帮忙！传授下经验呗！
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