组织消化(Tissue Dissociation)专题



组织消化(Tissue Dissociation)专题 — —原代细胞/肿瘤细胞制备


搜索关键词:

组织消化 Tissue dissociation;原代细胞;肿瘤细胞;细胞外基质;消化酶;胶原酶;中性蛋白酶;透明质酸酶;木瓜蛋白酶;DNase I;胰酶;胰酶抑制剂;


基本描述:

细胞原代培养具有广泛的生理意义,不仅可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段,还可服务于临床实践,用于药物筛选等前期研究。所谓原代培养就是将动物机体的各种组织,使用各种酶(比如胰蛋白酶、胶原酶)、螯合剂(如EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,并置于合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,并保持原有的基本性质的过程。通常将第一代至第十代以内的细胞培养过程称为原代培养。


原代培养最关键的一步便是获得需要的原代细胞,并维持其最佳的细胞活力,以提高成功培养和后期研究的几率。原代细胞制备最常用的方法即是酶解法,根据组织类型和对应的组织构造,常用以下一种或者多种酶组合的方法来达到水解目的。


1. 胶原酶 Collagenase

作为一种蛋白水解酶,常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶,胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列(高频出现在胶原collagen,很少在其他蛋白中发现)并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。不同于其他蛋白酶,胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维,这种胶原纤维广泛存在结缔组织。


我司(MKbio,懋康生物)提供的胶原酶来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有梭菌蛋白酶A(Clostridiopeptidase A),能够降解天然胶原和网状纤维;还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异,并结合科研团体的科研成果,应用上分类见下:

胶原酶类型                         

 

组分特征和应用

 

I型胶原酶(Type 1)

 

相对均量的多种酶活(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性);通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织的细胞制备。

 

II型胶原酶(Type 2)

 

含更高的梭菌蛋白酶活性;通常用作心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织的细胞制备。

 

III型胶原酶(Type 3)

 

含较低的蛋白水解活性;常用于乳腺细胞的制备;

 

IV型胶原酶(Type 4)

 

含较低的胰酶活性;通常用胰岛制备,和维持受体完整性比较重要的其他研究。也可用于髓系细胞制备。

 

V型胶原酶(Type 5)

 

部分纯化型,含更高的胶原酶和酪蛋白活性,更低胰酶水平以降低对膜蛋白和受体造成损伤。适用于胰岛制备。

 


产品订购信息:

货号                           

 

产品名称                                                    

 

规格                 

 

价格(元)       

 

期          

 

MX1001-100MG

 

Collagenase I 胶原酶I型(Type 1)

 

100mg

 

280

 

现货

 

MX1001-500MG

 

Collagenase I 胶原酶I型(Type 1)

 

5×100mg

 

1260

 

现货

 

MX1001-1000MG

 

Collagenase I 胶原酶I型(Type 1)

 

10×100mg

 

2200

 

现货

 

MX1002-100MG

 

Collagenase I 胶原酶I型(Type 2)

 

100mg

 

280

 

现货

 

MX1002-500MG

 

Collagenase I 胶原酶I型(Type 2)

 

5×100mg

 

1260

 

现货

 

MX1002-1000MG

 

Collagenase I 胶原酶I型(Type 2)

 

10×100mg

 

2200

 

现货

 

MX1003-100MG

 

Collagenase III 胶原酶III型(Type 3)

 

100mg

 

540

 

现货

 

MX1003-1000MG

 

Collagenase III 胶原酶III型(Type 3)

 

1g

 

3300

 

现货

 

MX1004-100MG

 

Collagenase IV 胶原酶IV型(Type 4)

 

100mg

 

280

 

现货

 

MX1004-500MG

 

Collagenase IV 胶原酶IV型(Type 4)

 

5×100mg

 

1260

 

现货

 

MX1004-1000MG

 

Collagenase IV 胶原酶IV型(Type 4)

 

10×100mg

 

2200

 

现货

 

MX1005-100MG

 

Collagenase V 胶原酶V型(Type 5)

 

100mg

 

520

 

现货

 

MX1005-1000MG

 

Collagenase V 胶原酶V型(Type 5)

 

1g

 

2800

 

现货

 


2. 中性蛋白酶Dispase II




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