T7 DNA连接酶

作者：张馨予

T7 DNA连接酶来源于T7噬菌体，它是一种ATP依赖型双链DNA连接酶，该酶可催化双链DNA相邻5′磷酸末端和3′羟基基团之间形成磷酸二酯键。T7 DNA连接酶可以有效地催化粘性末端和切刻的连接。与T4和T3 DNA连接酶不同，T7 DNA连接酶不能有效地催化平末端连接。因此，在实验过程中，当平末端和粘性末端同时存在时，仅需粘性末端发生连接，T7 DNA连接酶是理想的选择。

产品应用：

仅用于连接粘性末端。

dsDNA切刻修复。

产品来源：
重组E.coli质粒，含有T7 DNA连接酶编码基因。

单位定义：
1单位是指在20μL总反应体系中，1×反应缓冲液条件下，25℃温育30分钟，能使50%的100ng经HindIII消化的λDNA片段连接所需的酶量。

产品组成：
组分750KU100KUT7 DNA Ligase(30KU/μL)34μL250μL2×反应缓冲液1mL3×1mL
保存：-20℃

酶储存液：
10mM Tris-HCl，50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50% Glycerol，pH7.4@25℃

反应条件：
1×反应缓冲液，25℃温育。

缓冲体系：
1×反应缓冲液：
66mM Tris-HCl，1mM ATP，10mM MgCl2，1mM DTT，7.5% PEG 6000，pH7.6@25℃

质量控制：
T7 DNA连接酶经过严格的质量控制检测，以确保最高的纯度和反应效率。

注意事项：

ATP是必需的辅助因子。

当某些实验不能用PEG 6000时，可使用T4 DNA连接酶缓冲液，但活性会降低10倍。切记反应时体系内一定要有终浓度为1mM的ATP。

65℃加热10分钟可使T7 DNA连接酶失活。如果反应缓冲液中含有PEG，该酶不能加热失活，否则会抑制后续转化实验。
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