【实验求助】自噬流（autophagy Flux)怎么检测?

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

1.检测LC3II/LCI: lc3参与自噬的形成，自噬形成时，胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽，转变为(自噬体)膜型(即LC3-II)，LC3II升高代表自噬的启动；

2.检测P62：P62可以通过自噬来降解，因此P62可以反映自噬的强弱。当LC3 II升高，P62同时降低，表明自噬流通畅；如果LC3II 升高，P62升高，表明自噬起始正常，但下游不通，吞噬体和溶酶体不能融合。

3.除此之外，当自噬减退，如何鉴别其发生在自噬形成阶段OR自噬降解障碍呢？
可以通过RFP-GFP-LC3双标腺病毒检测。GFP在酸性环境中降解，红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体。如吞噬体和溶酶体能正常融合，那么红色荧光多于黄色荧光，如自噬下游阻滞，吞噬体和溶酶体不能正常融合，则主要为黄色荧光。