携带野生型质粒的菌落含有有活性的β

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

并不需要高浓度的IPTG来解除阻遏，因为硫代半乳糖苷是不可发酵的，不是β-半乳糖背酶的底物。在蓝/白筛选中，IPTG与X-Gal联合使用以鉴别表达β-半乳糖苷酶的重组细菌菌落或噬菌斑。有关进一一步详情，见第1章中的信息栏“a-互补”。

1.将熔化的顶层琼脂分装到17mmX 100mm试管中。把试管放入45"C的加热块待用。若是90mm平板，分装3mL; 150mm 平板则分装7mL。

2.从加热块取下第一管。迅速加入0.1mL细菌悬液，当使用90mm平板时所含活菌数要小于3000个，150mm平板则小于10 000个。关闭管盖，翻转几次使细菌在熔化琼脂中分散均匀。

3.打开试管，如表3-3中所示加入适当量的X-Gal和IPTG (如果需要)。关闭管盖，轻轻翻转几次以混合内含物。

4.将熔化的顶层琼脂快速倒入含适当的抗生素的硬琼脂平板，通过旋动分散溶液。

6.等软琼脂在室温下硬化，擦掉平板盖子上的凝露，然后将平板倒置在37C孵育12~ 16h.

7.从培养箱中取出平板，将它们在4'C存放几个小时，使蓝色显现。

●携带野生型质粒的菌落含有有活性的β-半乳糖苷酶。这些菌落的中心是淡蓝色，周边是深蓝色。

●携带重组质粒的菌落不含有有活性的β-半乳糖苷酶。这些菌落是乳白色或蛋壳蓝，有时在中心带着淡淡的蓝色斑点。在淡黄色背景下查看平板可以增强眼睛分辨蓝色和白色菌落的能力。