一种HepG2细胞高脂模型的构建方法及应用与流程

作者：杨超月

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种hepg2细胞高脂模型的构建方法。

背景技术：

非酒精性脂肪性肝病(nafld)是一种遗传-环境-代谢应激相关性疾病，包括单纯性脂肪性肝病、脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化等多种类型。随着生活水平的提高，nafld的患病率逐年上升，成为慢性肝病的首要原因。nafld本身会向肝硬化、甚至是肝癌进展，同时也会加速慢性肝炎等其他肝病向肝硬化、肝癌进展；nafld还可通过加剧机体代谢紊乱促进糖尿病、冠心病的发展，导致代谢综合征相关肿瘤及心血管事件的高发。此外，nafld患者的肝脏对很多药物和毒物的敏感性增加，这增加了临床用药风险。因此，加强nafld的相关研究有着重要的意义。

目前，非酒精性脂肪性肝病的发病机制尚未完全明确，只知道nafld的发病与胰岛素抵抗、线粒体功能障碍、氧化应激和肥胖等因素密切相关,且线粒体损伤引起的能量代谢障碍在nafld发病机制中起关键作用。建立合适的动物模型，对于研究非酒精性脂肪性肝病的发病机制及治疗方法均有着重要的意义。目前大鼠、小鼠等动物模型是研究nafld发病的重要实验载体,但存在实验周期长、个体差异大、影响因素众多和实验条件不易控制等缺点。

技术实现要素：

本发明的目的是解决现有技术中动物实验耗时长、个体差异大、实验条件不易控制等的问题，提供一种hepg2细胞高脂模型的构建方法。该体外脂肪变性细胞模型具有培养环境相对稳定、影响因素较少、实验条件易于控制和实验周期较短等优点。

技术方案

一种hepg2细胞高脂模型的构建方法，包括如下步骤：

(1)将hepg2细胞接种于6孔板，孵育20-30h后取出，设置对照组和模型组；

其中，对照组加含8-10v％fbs的高糖dmem培养基，模型组加含终浓度2.5mmol/l油酸的8-10v％fbs高糖dmem培养基；

(2)将6孔板置于37℃、5v％co2的培养箱孵育20-30h后去除培养液，接着用pbs清洗，然后进行消化，消化后离心，弃去上清液，往沉淀中再次加入pbs清洗，然后离心，弃去上清液，得到细胞沉淀，充分裂解细胞，得到细胞裂解液；

(3)将细胞裂解液离心，取上清液，测定tg和ldl-c含量，当模型组细胞比对照组细胞的tg和ldl-c的含量高时，模型组细胞即为hepg2细胞高脂模型。

步骤(1)中，高糖dmem培养基为市售购得，品牌是gibco，但不限于此。

进一步，步骤(1)中，含终浓度2.5mmol/l油酸的8-10v％fbs高糖dmem培养基的制备方法：70℃振荡水浴下将油酸溶于0.1mmol/lnaoh中，配成2.5mol/l的储存液，55℃振荡水浴下将上述储存液滴入20％bsa的pbs溶液中，配成浓度250mmol/l的使用液，过滤除菌，-20℃冷冻保存，使用前55℃水浴15min并冷却至室温,用完全培养基稀释至2.5mmol/l，即得；所述完全培养基为含有8-10v％fbs的高糖dmem培养基，完全培养基还含有1％的青霉素和链霉素混合液。

进一步，步骤(2)中，离心转速为1000r/min，时间为3min。

进一步，步骤(2)中，充分裂解细胞的方式是：采用western及ip细胞裂解液。

进一步，步骤(3)中，离心转速为10000r/min，时间为3-5min。

上述hepg2细胞高脂模型用于筛选降脂药物或食物的用途。利用该hepg2细胞高脂模型，可以评价哪些食物或药物对降脂有效果，给人们提供指导建议。

本发明的有益效果：是通过构建hepg2细胞高脂模型有效模拟人体高血脂的情况，从而以更加简便快捷有效的方法来测定食物或药物中能有效降脂的成分。

附图说明

图1是实施例1对照组hepg2细胞形态图；

图2是实施例1模型组hepg2细胞油红染色后的形态图；

图3是实施例1对照组和模型组hepg2细胞的甘油三酯含量；

图4是实施例1对照组和模型组hepg2细胞的低密度脂蛋白含量；

图5是实施例1加药组hepg2细胞的甘油三酯含量；

图6是实施例1加药组hepg2细胞的低密度脂蛋白含量。