马铃薯组织培养技术

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

　　一、马铃薯的组织培养

　　1、种薯的茎尖脱毒

　　植物组织培养也叫PlantTissueCulture，广义指在特定条件下，植物生长过程中，将离体的植物组织、细胞或原生质体，通过人工培养手段，促进其分化与生长，并在环境与技术的控制下，促使植物完成完整植株，过程生产次生代谢物质的技术。因为组织培养过程需要脱离母体完成，因此植物组织培养也叫离体培养。狭义指特定条件下，植物中的形成层、叶肉组织、薄壁组织、胚乳等部分，通过培养技术产生的植株，也是对植物器官组织的再培养，通过分化过程变成新的植物。

　　选择产量较高或抗病能力较强的块茎洗净后，在32℃下催芽或自然发芽。当块茎出芽长约30厘米时，切取带顶芽或侧芽的茎段约10～15厘米备用。将茎尖先用自来水冲洗干净后，用75%的酒精浸泡30s，再用0.1%升汞浸泡8～10min，然后用无菌水冲洗3～4遍后，在显微镜下剥取带两个叶原基的茎尖接种到装有脱毒培养基的试管斜面上，每个试管内接种一块愈伤组织，在25℃左右的培养室进行培养。脱毒培养基一般为MS培养基中加入0.5mg·L-16-BA、0.1mg·L-1GA3和0.1mg·L-1NAA。观察其生长状况，剔除污染及未成活的试管苗。

　　2、试管苗扩繁

　　配制好MS培养基后，趁热分装入三角瓶中，进行高压灭菌。观察3～5天，剔除污染的试管后，准备接种。将工作服、套袖、剪刀、镊子、培养皿等进行高压灭菌。将拖鞋及灭菌好的工作服放入缓冲间，对接种室的空间进行熏蒸消毒，每接种一个星期左右熏蒸一次。将盛装75%的酒精瓶放在超净工作台附近，在工作台内放入酒精灯、打火机、浸泡的酒精棉球、灭菌器等所需物品，每次接种前需将超净工作台用紫外灯进行杀菌半小时左右，20min后工作人员方可进入。

　　接种人员先换上拖鞋、剪掉手指甲、用香皂洗净双手后，进入到缓冲间内。换上拖鞋及工作服后，进入接种室，用75%的酒精对双手、套袖进行喷雾消毒，然后就座于超净工作台前，点燃酒精灯，用酒精棉球对双手及台面进行消毒，将试管先用酒精棉球擦拭，然后用酒精灯轻微灼烧试管口及棉塞，在酒精灯火焰下10cm以内拔掉棉塞，将镊子在酒精灯火焰下灼烧，带晾凉后夹出试管苗，用剪刀剪掉剩余培养基后，将试管苗放在培养皿内，培养皿在酒精灯附近10cm内。将剪刀进行酒精灯火焰灼烧晾凉后，用剪刀将试管苗剪为数段，每段要留1片小叶。将带有培养基的三角瓶先用酒精棉球擦拭，然后在酒精的火焰下对瓶口进行消毒，稍凉片刻，用镊子将试管苗在酒精灯火焰下10cm以内接入到三角瓶内，每瓶接种10段左右，火焰封口后，贴上标签，标签上要标注接种时间、品种及接种人。重复此操作直至将培养皿内的苗全部接完后，将培养皿用酒精棉球擦拭，在酒精灯火焰下灼烧后放回原处，进行下一个试管苗或另一个品种的接种操作。

　　接种结束后，将接种好的三角瓶放到培养室内培养，25℃左右，每天用照明灯补光，光照16h，观察其生长状况，剔除污染及未成活的试管苗。一个月左右后进行下一次组织扩繁。

　　3、壮苗及生根培养

　　马铃薯组织培养时，增加细胞分裂素浓度，可以促进增殖系数的提升。但随着增殖系数的增多，会抑制增殖芽的生长趋势，不定芽更加细小，不能进行下一步生根培养;即使可以进行下一步，成活率也会降低，还需另外进行壮苗培养。马铃薯的壮苗培养基为1/3MS+0.05mg·L-1NAA。

　　生根培养是使无根苗生根形成完整植株的过程，这个过程的目的就是使组培苗生长出浓密而粗壮的不定根，以提高组培苗对外界环境的适应力及驯化移栽的成果率，获得更多高质量的商品苗。马铃薯组培苗的生根培养是将未生根的组培苗转接入生根培养基中继续培养使其生根的过程。马铃薯的生根培养基为1/2MS+0.20mg·L-1NAA，适当加大植物生长素的用量，使其快速生根。

　　4、煉苗及移栽

　　马铃薯组培苗经过生根培养后，便可出瓶移栽。移栽后的组培苗需在特定条件下，如无菌条件、营养、温度、光照、湿度等，都有较高的要求，要想植物移栽后的生长满足生长条件，就需要人工创造条件。后期还需使用出瓶种植，让植物接触自然环境，与人工环境有较大差距，如温度与湿度等，改变了人为的条件，短时间中组培苗适应不能适应。因此，组培苗必须移出培养室，在室温下炼苗3-5天。