蛋白质银染原理与方法

作者：杨超月

原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是 2～5.0ng／蛋白条带。

①

SDS-PAGE电泳。注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与Commassie

Blue染色比较，银染加样量要少。否则难以得到清晰的电泳分辨率。

②

电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。加入25ml Fixing

Solution（固定液），室温振荡保温30min。胶需要完全淹没在固定液中。

③ 彻底弃去固定液，加入25ml

Incubation

Solution（保育液），室温振荡保温30min。胶需要完全淹没在保育液中。

④ 彻底弃去Incubation

Solution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。

⑤ 准备：取2.5ml 10X

Silvering Solution, 加入22.5mL水，混匀后使用。

⑥ 弃去洗涤的水，加入25ml

Silvering Solution (银染液)。室温振荡保温20min。

⑦ 彻底弃去银染液，加入25mL

Developing

Solution（显色液），室温振荡保温1~10min。注意观察目的条带。如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。显色时间不要过长，否则本底较深。

⑧ 彻底弃去显色液,

加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。

⑨ 彻底弃去Stopping

Solution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。

弃去洗涤的水，加入25mL Preserving

Solution（保护液），室温振荡保温20min。银染PAGE胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。