微小核糖核酸荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立及其在急性肺损伤中的表达分析

作者：张馨予

目的探讨微小核糖核酸(miRNA)荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法的建立条件,并运用这一方法对急性肺损伤中miRNAs的表达进行分析.方法设计miRNA特异的颈环结构反转录引物,对miRNA进行反转录,得到miRNA的环状脱氧核糖核酸(cDNA).分析miRNA cDNA定量PCR过程中的标准曲线和熔解曲线,确定该检测方法的检测灵敏性和特异性.应用miRNA的荧光定量PCR检测方法分析脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤小鼠中miRNA的表达.结果 miRNA特异的颈环结构反转录引物实现了miRNA长度的延长.通过对心肌特异表达的miRNA-1进行实时荧光定量PCR检测,表明miRNA-1是心肌组织特异表达的miRNA.通过该方法对LPS诱发的急性肺损伤小鼠(急性肺损伤组)进行分析,发现与对照组比较,急性肺损伤组的miRNA-23a的相对表达量显著降低(P＜0.05),miRNA-155、miRNA-451的相对表达量显著升高(P值均＜0.01),miRNA-21的相对表达量未发生改变(P＞0.05).结论本实验建立的miRNA实时荧光定量PCR具有较高的精确性和特异性,通过该方法发现多种miRNA在LPS诱发的急性肺损伤中异常表达.