Propidium Iodide染色液(PI,碘化丙啶)

作者：张馨予

PI染色液可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。Propidium Iodide是一种DNA 结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。也可采用流式细胞仪利用细胞形态上的改变影响它们的光散射特性改变进行分析，还可与RNase A结合进行细胞周期分析。

储存条件：4℃避光保存。长期保存-20℃避光保存。
有效期：六个月。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● Propidium iodide是光敏物质，请注意避光。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

使用方法：

使用注意事项：
●本染色液用于细胞染色分析，也可用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，细胞染色可用预冷的70%的乙醇固定，4℃，1-2小时，也可不固定，其他方法请参阅相关资料。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后请尽快检测。
●染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
● PI有毒，操作时要戴上手套。
● 流式检测细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA 结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。
荧光显微镜观察
1．收集细胞，PBS洗涤细胞一次，2000rpm离心5分钟，用PBS重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；
2．取100μl细胞悬液，加入2-10μl PI染液，轻轻混匀；
3．4℃避光放置5min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；
4．荧光显微镜检测。
流式检测：
1．收集细胞，PBS洗涤细胞一次，2000rpm离心5分钟，用PBS重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；
2．500μl细胞悬液中加入5μl PI染液；
3．4℃避光放置30min；
4．流式细胞仪检测。

结果分析：
置于荧光显微镜下用488nm 激发光观察结果：正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。
流式检测用氩离子激发荧光，激光光波波长为 488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0 期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0 期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。
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