一种产呈味核苷酸二钠的微生物发酵方法与流程

作者：张馨予

本发明属于微生物领域，具体涉及一种产呈味核苷酸二钠的微生物发酵方法。

背景技术：
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呈味核苷酸二钠(i+g)是由5’－肌苷酸二钠(imp)和5’－鸟苷酸二钠(gmp)按照1：1比例混合的増鲜产品。由于高强的増鲜特性及消除抑制异味的功效，i+g被广泛应用于调味包、酱料、保健品以及其他相关食品加工中。目前生产呈味核苷酸二钠的主要方法有化学合成法，酶催化法，自溶法和发酵法。其中化学合成法和酶催化方法都需要用到核苷酸为原料，生产利用度较低，成本较高。酶催化法耗能，自溶法对菌株的酶活要求特别高，而且酶效的条件都非常苛刻。所以发酵法是大量生产呈味核苷酸二钠的最有优势的方法，但是此工艺需要有高产的菌株作为依托。越来越多的证据证明细菌的菌株水平上的差异决定了它们的功能，也就是说即使同一种属，不同菌株的功能都是不一样的。所以本发明，从发酵产物中的呈味核苷酸二钠最高为衡量标准，去寻找最佳条件。

技术实现要素：
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本发明的第一个目的是提供一种产呈味核苷酸二钠的微生物发酵方法。

本发明的产呈味核苷酸二钠的微生物发酵方法，是将lactobacillusacidophiluszsq11cicc10481进行发酵，从发酵液中获取呈味核苷酸二钠。

优选，所述的将lactobacillusacidophiluszsq11cicc10481进行发酵，其发酵培养基是：

每升水中含玉米粉10.0g、谷氨酸1.0g、新鲜牛肉5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、糖蜜水20.0ml、吐温801.0ml、乙酸钠5.0g、磷酸氢二钾2.0g、ph6.2～6.6。

优选，所述的发酵温度为37℃，发酵时间为36h。

本发明的第二个目的是提供lactobacillusacidophiluszsq11cicc10481在产呈味核苷酸二钠中的应用。

本发明发现lactobacillusacidophiluszsq11cicc10481能够发酵产生呈味核苷酸二钠，因此可以利用发酵法是大量生产呈味核苷酸二钠，应用于调味包、酱料、保健品以及其他相关食品加工中。

本发明的lactobacillusacidophiluszsq11cicc10481于2011年8月9日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心(cicc)，其是公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享，任何人都可以去该中国工业微生物菌种保藏管理中心购买到该菌株。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

1.lactobacillusacidophiluszsq11cicc10481的培养基是改良的mrs固体培养基：

蛋白胨10.0g、谷氨酸1.0g、酵母膏5.0g、柠檬酸氢二铵[(nh4)2hc6h5o7]2.0g、葡萄糖(c6h12o6·h2o)20.0g、吐温801.0ml、乙酸钠(ch3coona·3h2o)5.0g、磷酸氢二钾(k2hpo4·3h2o)2.0g、硫酸镁(mgso4·7h2o)0.58g、硫酸锰(mnso4·h2o)0.25g、琼脂18.0g、蒸馏水1000ml，ph6.2～6.6。将上述各成分混合均匀，调ph值，灭菌即得。

改良的mrs液体培养基是指改良的mrs固体培养基中去掉琼脂。

2.发酵液的制备

将从15％(v/v)甘油保存的lactobacillusacidophiluszsq11cicc10481菌种活化，具体活化方法是接种到3个改良的mrs固体培养基中，等生长出明显的菌落后，用2mlpbs溶液把每个平皿菌洗脱出来，分别加入到3个200ml改良的mrs液体培养基中，37℃静止培养36h后，把3个200ml培养液合在一个1l的三角瓶中，然后接种到5l发酵培养基(每升水中含玉米粉10.0g、谷氨酸1.0g、新鲜牛肉5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、糖蜜水20.0ml、吐温801.0ml、乙酸钠5.0g、磷酸氢二钾2.0g、ph6.2～6.6，其配制方法是在每升水中添加玉米粉10.0g、谷氨酸1.0g、新鲜牛肉5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、糖蜜水20.0ml、吐温801.0ml、乙酸钠5.0g、磷酸氢二钾2.0g，然后调ph值6.2～6.6，灭菌制得)中发酵，,以改良的mrs液体培养基作为对照(蛋白胨10.0g、谷氨酸1.0g、酵母膏5.0g、柠檬酸氢二铵[(nh4)2hc6h5o7]2.0g、葡萄糖(c6h12o6·h2o)20.0g、吐温801.0ml、乙酸钠(ch3coona·3h2o)5.0g、磷酸氢二钾(k2hpo4·3h2o)2.0g、硫酸镁(mgso4·7h2o)0.58g、硫酸锰(mnso4·h2o)0.25g、蒸馏水1000ml，ph6.2～6.6)发酵温度控制在37℃静止培养，发酵时间为36小时，得到呈味核苷酸二钠发酵液；

3、前处理

把5l呈味核苷酸二钠发酵液，以5000rpm的速度离心后收集菌体，去掉上清，把菌体放入-80℃预冷8h以上，然后放在冷冻干燥机中干燥24h(-65℃)，即可得到菌体的干粉。

4、呈味核苷酸二钠的测定

准确称取菌体的干粉2g、2.5g、4g,用少量0.01mol/l的盐酸溶液溶解,定容于100ml的容量瓶中,混匀,过滤,弃去初滤液,吸取滤液5.00ml于100ml的容量瓶,用0.01mol/l的盐酸溶液定容至100ml,混匀,此溶液即为测试液。将测试液注入10mm的石英比色皿中,以0.01mol/l的盐酸溶液做空白,测量在波长250nm下的吸光度。

呈味核苷酸二钠含量应按下面方程式计算:

式中:

x:样品中呈味核苷酸二钠的含量(含7.25分子结晶水),g/100g菌体干粉；

a:样品在波长250nm处的吸光度；

530:含7.25分子结晶水呈味核苷酸二钠的平均分子量；

2000:样品的稀释倍数；

m:样品的质量,g；

11950:呈味核苷酸二钠的平均摩尔吸光系数。